關于滅菌驗證的10個注意事項

注意事項 1：選擇正確的滅菌周期

有三種基本類型的滅菌周期。根據待滅菌物質的類型進行選擇。

堅硬裝載（真空）

適用于那些易于滅菌的物質，因為空氣清除和蒸汽穿透對這些物質是高度有效的。例如：敞開的玻璃器皿和大口徑的管道。

典型的堅硬物品滅菌循環在通入蒸汽達到設定滅菌溫度前需要達到一個真空度。

包裹物品（真空）

用于滅菌困難的物品，因為和堅硬品比起來空氣清除和蒸汽穿透更難實現。

例如，有蓋子的空瓶（玻璃或塑料），潔凈服，長軟管/管子，抽氣過濾器，進/出口小的便攜式容器。

一個典型的包裹品滅菌循環在滅菌前至少進行 3 次抽真空。滅菌后通過真空將負載中的蒸汽抽走。

液體（非真空）

一般含有液體的物品不能有大的真空度，否則液體會溢出。針對液體來說高壓滅菌鍋循環是在沒有真空度的情況下加熱和冷卻。蒸汽進入腔室頂部置換空氣，空氣推入腔室的底部并排出。

選擇正確滅菌驗證循環的步驟：

注意事項 2：使用哪一種負載配置

需要考慮的一個因素是選擇固定裝載還是可變的裝載。在驗證和操作靈活性之間需要一個權衡- 你是否驗證最（zui）大最小裝載以增加生產的靈活性？下面是需要考慮的一些典型裝載模式：

固定裝載/固定位置模式 意味著, 任何待滅菌裝載將以完全相同的方式放置在室內。在標準作業流程（SOP）中應有負載配置的圖表，因此操作者可以在腦海中再現每一個運行過程的負載。這種情況要求最少的驗證運行（3），但負載配置沒有靈活性。

固定負載/可變位置模式 指負載在高壓滅菌器內的位置是可變的。在 SOP 中只需一個負載列表。在測試運行過程中，驗證運行應通過輪換負荷物品逐個位置論證不同位置的等效性。如果經過 3 個run的驗證證明了位置的等效性那就可以停止。固定負載/可變位置的模式給操作者操作高壓滅菌器時帶來靈活性。針對包含不同物品的大負載來說，這樣可以節省時間。

可變負載配置指腔室內物品種類和/或數量不固定。驗證運行時必須表明此循環周期可以滿足最（zui）大和最小兩個負載模式。最小負載測試高壓滅菌器腔室一個物品，必須證明其是最難滅菌的一個物品。

注意事項 3：選擇合適的液體循環監控裝置

液體滅菌時所選的監控決定了待滅菌的負載能否通過接收標準。

需要不止一個液體監控裝置以證明不同類型的瓶子和液體能滿足滅菌要求。選擇液體循環監控裝置時需考慮以下因素：

●瓶子的大小和填充量-瓶子越大其體積越大，就越難滅菌。

●玻璃的厚度，厚玻璃比薄玻璃難滅菌。

●液體的粘度 – 粘度越大傳熱越慢，就越難滅菌。

理想情況下，液體監控裝置所在應是最難滅菌的（最壞情況），放置在腔室內最冷點（靠近前門或在排水口正上方）。

不要試圖使用與待滅菌裝載完全不通過的液體監控裝置，如果液體控制需要很長時間來達到滅菌溫度，則負載其他位置中的蛋白質可能會變性（在監控裝置到達滅菌溫度的過程中，可能已經超出所要求的溫度）。

不要對不同組分的負載嘗試控制，如果液體控制需要很長時間還達不到滅菌溫度，則負載介質中的蛋白質將會變性（這可能已經超出了控制的時候達到殺菌所需的溫度）。

可以根據相似粘度，瓶子大小和填充量大小進行分組，減少不同類型的液體和瓶子所需驗證測試的次數。每個液體控制將有一個與之相關的最（zui）大和最小負載配置。

使用程序化的控制，以確保每個液體控制所使用的液體、瓶子體積、填充量，及其在腔室內的位置，在驗證期間和后續操作過程中保持一致。

注意事項 4：確定哪些裝載物品是最難滅菌的和哪些位置最能代表滅菌的最差情況

由于負載包含很多不同類型物品，需要檢測的位置似乎很多。在不影響物品滅菌能力或破壞物品（關注貴重物品）的情況下，將熱電偶和指示劑（BI 與 CI）放入物品中也是非常困難的。

我們必須逐個逐個評估每個物品，確定最（zui）佳挑戰方式。通常,物品必須以某種方式密封,以確保其蒸汽滲透狀態不變。

舉例：

問：一個直徑均一的軟管內哪一點最難滅菌？

答：在軟管長度的中（zhong）心。

問：如何將一個 3 米長的熱電偶插入 20 米的軟管中間？

答：在軟管中間刻一插槽，熱電偶沿著插槽插入軟管，確保用硅膠將插槽密封，如果你沒有密封，則不能挑戰軟管。或者，將兩個 10 米的軟管（如有）插入熱電偶后用連接器將其連接，用這種方法則不用破壞 20 米長的管子。

問：瓶子、錐形瓶和柱形瓶那個位置最難滅菌？

答：在靠近底部的中間（但不接觸底面）。

問：如何保持熱電偶在一個密封瓶子里的位置？

答：選擇一個內徑與熱電偶探頭相近的硅橡膠管件套住它以確保不會滑落。在瓶蓋上鉆一個和管子外徑一樣大的孔。通過孔將管子插入瓶中。將探頭推入管子中，推動探頭直至到達瓶子中所需位置。確保它不會觸碰瓶壁。對于橡膠瓶塞的瓶子，在篩子中間鉆一個小孔，足以使熱電偶通過。

注意事項 5：有線熱電偶較復雜，且并非總是提供準確的數據

下面重（zhong）點介紹一些使用熱電偶傳感器時的注意事項：

●當導線的外層塑料保護膜被切割并且有空氣或蒸汽通過，就會發生一些蒸汽損耗（泄漏），可能會導致泄漏測試失敗。

●在腔室內的熱電偶會吸冷凝水，需要在腔室外部將熱電偶保護層切開以將冷凝水釋放。如冷凝水通過熱電偶流到驗證儀電子元件，熱電偶將損壞。

●熱電偶可能難以在不影響物品滅菌和/或破壞物品 (貴重物品)的情況下，放入物品中。

●當進料或出料時熱電偶可能被高壓滅菌器的輪子卡住（并損壞）。

●將熱電偶裝在密封瓶里并且不碰到內壁是很難做到的，并且降低瓶子的無菌程度。

●你可能會受限于高溫滅菌器進口的導線數量。

即使前/后校準確認符合標準，某些位置熱電偶電阻也會發生變化，從而導致數據不準確和/或不可靠。

示例：

此示例包含裝載腔室內的9個熱電偶。他們均勻分布在頂部，中部和底部，以及前、中、后部。

該研究使用有線熱電偶用于測試 121.1℃ 40 分鐘的負載腔體 。內室最（zui）大壓力 2.16bar（在任何時間）相當于 122.7℃。一個探頭（頂部前左）溫度持續維持在123.3℃ - 123.5℃之間。所有其他探頭則在規定溫度范圍120.1℃ +2 ℃/-1℃內，在122.4 ℃至 122.7℃之間。

溫度偏差開始于加熱階段，并在滅菌和真空冷卻階段仍然存在。該設備工程師和制造商一致認為，在這個點的溫度讀數是不準確和不可靠的。熱電偶讀數與蒸汽壓力讀數以及其他熱電偶讀數不一致。因此，在這一點沒有任何有用的數據。

注意事項 6：確定接受標準

一個例子：當您運行驗證測試時，您只認識到能不能達到接受標準。但是，是不是真的需要擺在首位？

重要的是要了解滅菌柜的周期及其參數。例如，是用于滅菌還是降低負荷？負載是熱敏感的嗎？還是可以承受過度滅菌？是多孔裝載（堅硬/包裹的物品）嗎？還是液體？

大多數驗證部門有標準操作程序（SOP）詳細說明滅菌工藝驗證的要求。列出所有接受標準的完整清單。

滅菌柜不同階段的循環周期存在不同的遵循標準：

第（di）一階段 - 熱分布（空載）

第（di）二階段 - 熱分布（裝載）

第三階段 - 熱分布（裝載）內部冷點測定

第四階段 - 熱穿透

對于滅菌液體（非真空）和多孔裝載（真空），第三階段和第四階段可能存在不同的要求，例如滅菌結束時 F0>15（只針對液體）。

典型的接受標準如下：

●所有多孔裝載程序要求結束時SAL≤10-6。所有多孔物品至少進行一次后真空循環以消除滅菌腔室內的蒸汽（階段三和四）。

●所有液體循環周期要求SAL≤ 10-6，并且F0 > 15，因為它們不使用真空，并自然冷卻（階段三和四）。

●在整個滅菌階段所有的溫度都在 3℃的變化范圍內（階段二，三和四）例如，121.1℃-1℃/+2℃。

●在整個滅菌階段，滅菌柜各探頭溫度在平均溫度±1.0 ℃范圍內，（階段二）。

●蒸汽的溫度與其蒸氣壓力相適應（階段 II，III 及 IV）。

●時間計時控制在±1%的精度范圍內（階段 II，III 及 IV）。

●驗證前和驗證后溫度測量系統的準確度在±0.5℃的范圍內。

●滅菌結束時裝載目測干燥（只針對多孔裝載）。

●所有生物指示劑培養結果陰性，陽性對照陽性（階段IV）。

注意事項 7：充分記錄驗證測試

記錄驗證測試期間進行的工作,就是了解需要記錄的內容以及如何記錄它。記錄清晰、一致和一目了然,并且必須符合所有 GMP 要求。它必須是完整的,并且必須包括以下項目:

●顯示高壓滅菌腔室內所有裝載物品位置的圖表

●各熱電偶、BI、CI的數目和精確位置

●數據記錄器（熱電偶）打印輸出

●從滅菌器打印或輸出圖表

●滅菌周期起始和結束（根據數據記錄器的時間）

●高壓滅菌柜控制器和溫度驗證儀的時間差

●各生物指示劑和化學指示劑的結果

●每個記錄分別標明設備ID、負載說明、日期、測試編號和循環開始/結束時間

當進行驗證測試過程中，如果你沒有良好記錄，在報告時，你將無法進行數據分析。用不充分或不良的數據來支持驗證過程將無法通過審計。

提示

注意謹慎使用熱電偶的精確度接受標準，如果標準過高（如所有的熱電偶必須達到接受標準），如有一或兩個熱電偶停止工作或在測試后超出溫度容許偏差，則可能會丟失大量運行。

注意事項 8：熱電偶準確度確認的頻率

如果你正在進行（如，在幾個星期內）大量的驗證測試，你需要考慮熱電偶的準確度。可以在每次運行和/或在整個測試周期結束后進行。如果等到測試周期結束,則存在由于熱電偶未滿足接受驗收標準而導致所有測試失效的風險。但是，在每次測試后做檢查，則會大大增加完成測試所需的時間。每三次運行或每隔幾天執行一次準確性檢查是一種合理的折衷方案。

正如注意事項 6 指出，驗證熱電偶的準確度，應允許至少一個或兩個熱電偶失效。

注意事項 9：確保足夠的時間和支配來完成驗證

人們很容易低估驗證高溫滅菌器所需的時間，以及在整個驗證過程中你需要做些什么。

例如，可能需要長達四個小時進行準備，例如，準備裝載，放置探頭，將BI和 CI 放入負載中等。如果生產需要使用高壓滅菌器，你需要將探頭，BI 和 CI挪出來，然后從頭再來，白白浪費一整天。在規劃驗證項目時與生產部門合作，以確保你能有足夠的支配。

另一種方法是將階段II、階段III（熱分布）與階段IV（熱滲透）結合在一起，以節省時間。

這三個階段結合一起做可以減少完成驗證的時間，不過，這樣做需要考慮以下幾點：

1、需要同時將探頭放入墻體內和負載物上。通過高壓滅菌器驗證口你能安裝所有的探頭嗎？如果不能，那么你需要單獨驗證每個階段，或降低探頭的數量。

2、這三個階段結合在一起做會大大增加你的準備時間。如果你的時間較緊(例如，在需要在特定時間撤離的建筑工地上),，你可能沒有時間完成這項分析。如果發生這種情況，那么它需要完成的時間比單獨做每個階段的時間要長。

3、如果你的時間很緊，將很容易遺忘一些東西或者犯錯誤。

4、還有更多的數據需要考慮。進行下一個研究前，如果你只檢查了幾個關鍵點，您可能會疏忽一些不符合驗證標準的內容，這可能意味著所有后續的研究處于風險之中，因為數據無法得到證實。例如，一個探頭讀數可能過高。

5、準備充足的時間來完成報告。

如果你是對新的高壓滅菌器進行驗證，那么你需要足夠的時間進行：

（一）編寫驗證計劃

（二）編寫試機和 IQ方案

（三）準備 OQ / PQ方案

（四）開展 OQ / PQ 的研究

（五）編寫 OQ / PQ 的報告，準備文件等

如果你正在進行（例如，在幾個星期內）大量運行測試，那么你需要確保有足夠的時間準備文件和編寫報告。確保測試一整天，再用一整天來分析數據，也就是說，每項測試2天。同樣預留充足的時間編寫方案和報告，并進行審核簽批（如適用）。如果你正在開發驗證程序，那么這也將需要時間。

注意事項 10：制定正確的程序進行控制，以確保持續一致和正確操作

恭喜你，你剛剛完成了一個包含不同周期和負載的新滅菌柜的驗證。現在，需要那些控制，確保一致地使用經驗證的裝載？

●準備新高溫滅菌器的標準操作程序（SOP）。對每個驗證程序必須有明確的指引，包括負載圖。應準備新高壓滅菌器的標準操作程序 (SOP)。它必須包括每個經過驗證的周期的明確準則,包括負載配置圖。要求一個典型操作員按照SOP進行操作來檢查SOP的清晰度。

●對每個使用高壓滅菌器操作者進行培訓和SOP 考試。

●每個程序都應有記錄。

●采用基于風險評估的方法制定檢修指南，包含在 SOP 里。制造商的文件和網站可能有常見故障的詳述。

●對于高壓滅菌器和裝載來說，持續再確認程序是必需的，頻率可為6，12或24個月。

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